槲寄生(ramulus visci)来源于桑寄生科槲寄生[Viscum coloratura (Kom．)Nakai]的带叶茎枝，为我国传统中药，性平、味苦，归肝、肾经，有祛风湿、补肝肾、强筋骨、安胎作用；现代药理学研究表明，槲寄生粗提物、槲寄生总蛋白、槲寄生总生物碱具有抗肿瘤活性[1,2 ]，为更好研究其生物碱的抗肿瘤作用，需要建立槲寄生总生物碱的含量测定方法，控制槲寄生的质量，提高提取物中总生物碱的产率及含量。

1 仪器、试剂与药材
    Tu一1901型双光束紫外可见分光光度计(北京普析),DHC-3型酸度计(上海雷磁仪器厂)；硫酸阿托品对照品(河南省许昌华仁制药有限公司)，溴甲酚绿(分析纯，中国医药公司)，其他试剂均为分析纯；槲寄生饮片4种(分别产于山西、内蒙、辽宁、云南)，经山西医科大学白云娥副教授鉴定为桑寄生科植物槲寄生[Viscum coloratum (Kom．)
Naka 的干燥茎叶。
2 方法
    2．1 样品溶液的配制与测定精密称取槲寄生粗粉2 g，以75％的乙醇为溶剂索氏提取5 h，浓缩提取液至约2 ml，加蒸馏水16 ml，用2 mol／L的盐酸调pH至3—4，抽滤，滤液用浓氨水调pH至9—10，用氯仿萃取3次，每次20 ml，合并氯仿液，蒸干，得氯仿萃取物；水层再用正丁醇萃取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，得正丁醇萃取物。氯仿和正丁醇萃取物加无水乙醇溶解并转移至10 mI容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，得样品溶液。
    2．2 对照品溶液的配制 精密称取硫酸阿托品对照品约25 mg，置于100 ml的容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，备用。
    2．3 溴甲酚绿缓冲液的配制l J 精密称取溴甲酚绿125 mg，用0．2 mol／L的NaOH 12．5 ml溶解后，加入邻苯二甲酸氢钾2．55 g，加少量蒸馏水溶解后，转移至250 ml的容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，备用。
    2．4 测定方法精密量取样品溶液1 ml，置入已放入10 ml氯仿的分液漏斗中，再精密加入2 ml溴甲酚绿缓冲液，振摇1 min，静置至氯仿液澄清，分取氯仿层，以溴甲酚绿缓冲液饱和的氯仿液为空白，在420 nm处测其吸收度。测定对照品溶液时，用蒸馏水稀释成所要浓度后按样品相同方法进行测定。
    2．5 测定波长的选择精密吸取对照品溶液、样品溶液各1 ml，分别加入已放入10 ml氯仿的分液漏斗中，再分别精密加入2 ml溴甲酚绿缓冲液，振摇1 min，静置至氯仿液澄清，分取氯仿层，分别取氯仿层、样品乙醇液和溴甲酚绿缓冲液水稀释液，分别在190—800 nrn范围内扫谱，测定其最大吸收。结果对照品溶液与样品溶液显色后在420 nrn处均有最大吸收，且不受样品溶液、溴甲酚绿缓冲液干扰，所以选择420 nrn为测定波长。

3 方法学考察
    3．1 线性关系考察精密吸取对照品溶液1 ml，2m1．3 ml，4 ml，5 m1分别置于10 ml容量瓶中，定容，各取1 m1按2．4项下方法进行测定。以硫酸阿托品量X为横坐标，以吸光度y为纵坐标作标准曲线，得回归方程Y=0．004 9X一0．026，r=0．9997，表明硫酸阿托品在25—125(t~g／m1)的范围内线性关系良好。
    3．2 精密度试验取75(btg／m1)对照品溶液，按2.4项下方法重复测定5次，RSD=0．50％，表明精密度良好。
    3．3 重现性试验分别取同一批供试品5份，同法测定，RSD=1．2％，说明重现性良好。
    3．4 稳定性考察在室温下每隔1 h测定供试品溶液，结果表明样品需静置2 h以上稳定，0—6 h内RSD=45．5％，2—6 h内RSD 0．62％，说明样品需静置2 h以上测定。
    3．5 加样回收率试验精密称取已钡4定含量的样品粉末3份，各约1 g，至索氏提取器中，分别精密加入对照品溶液各0．5 ml(50 btg／ml，75 btg／ml，100btg／m1)，制备供试品溶液，在420 nm处测定吸光度，结果平均回收率为102．8％，RSD为2．5％。

4 各产地药材总生物碱含量
    将4种不同产地的槲寄生药材分别制备供试品溶液，在420 nrn处测定吸光度，如超出线性范围，稀释至适当倍数测定，结果为云南0．84 mg／g，山西0．92 mg／g，内蒙1．10 mg／g，辽宁3．80 mg／g。结果发现辽宁产的槲寄生总生物碱含量比其他产地要高，说明建立槲寄生总生物碱的含量测定方法，对药材的质量控制和生物碱的进一步研究提供参考。

5 讨论
    由于硫酸阿托品在水中溶解度大，显色后用氯仿萃取时需静置足够时间使反应趋于平衡。经多次试验，静置约45 min后测定比较稳定，因此在绘制标准曲线时一定要静置45 min后测定。实验结果表明，除辽宁产槲寄生总生物碱含量特别高以外，其他三个产地总生物碱含量相差不大。